背景与意义

• HIV-1简介
  • 反转录病毒科慢病毒属，分HIV-1和HIV-2型
  • HIV-1为全球艾滋病主要流行株
• HIV-1 RNA检测局限
  • 窗口期检测、婴儿早期诊断、功能性治愈评估难
• HIV-1 DNA检测价值
  • 反映病毒储存库及潜伏状态
  • 作极早期诊断标志物
  • 评估cART疗效、预测预后、功能性治愈研究

总HIV-1 DNA与HIV-1病毒储存库

• DNA类型
  • 按完整性和功能，分完整型和缺陷型
  • 按分子结构和存在形式，分整合、线性和环状
• 转录活性
  • 整合型和未整合型均有转录活性
• 对病毒储存库影响
  • 整合型影响病毒储存库维持和慢性炎症应答
  • 线性与环状转换是动态维持核心机制
  • 1-LTR环状DNA可复制并产生病毒粒子
• 标志物作用
  • 评价HIV-1病毒储存库和疾病进展

总HIV-1 DNA检测技术

• 样本类型
  • 全血、干血斑、PBMC、人体淋巴组织
  • 全血与PBMC检测结果强相关
• 发展历程
  • 20世纪80至90年代初，用放射性同位素标记DNA
  • 1990-2000年，巢式PCR结合毛细管电泳为主
  • 2000年后，实时荧光定量PCR、数字PCR等为主
• 具体方法
  • qPCR法：基于荧光探针或染料监测扩增，结合Ct值定量；单管qPCR法可消除误差，细胞数作内标；报告结果应结合细胞数
  • ddPCR法：分割样本为微反应单元，基于阳性比例和泊松分布计算拷贝数，无需标准曲线

总HIV-1 DNA检测在HIV-1感染诊断中的应用

• 与窗口期
  • 核酸检测窗口期短于抗原抗体检测
  • 在特殊人群中，HIV-1 DNA检测更优
  • 缩短诊断至治疗时间，减少病毒储存库积累
• MSM筛查/诊断
  • 快速检测有窗口期漏检风险
  • 总HIV-1 DNA检测可纠正错误结果
• PrEP和PEP人群感染监测
  • 药物可致检测假阴性
  • HIV-1 DNA检测可减少漏诊
• WB检测抗体不确定人群的检测
  • 可作核酸补充试验
  • 联合HIV-1 RNA检测可早期诊断
• 其他疑难样本的诊断
  • 辅助假阳性、假阴性、LLV和精英控制者等诊断
• 暴露婴儿早期诊断
  • 多版规范强调核酸检测
  • 总HIV-1 DNA定量检测敏感性和特异性高
• 检测局限性
  • 慢病毒疫苗或药物治疗者可能假阳性
  • 检测方法、采样、样本保存因素可能假阴性

HIV-1感染人群的总HIV-1 DNA分布特征

• 国外不同感染情况人群载量：急性感染者、感染6-24个月患者、不同时期启动cART的慢性感染者、精英控制者、停药后病毒不反弹者
• 国内不同人群载量：慢性感染者、初治患者不同亚型

总HIV-1DNA载量在cART中的目标值

• 总HIV-1DNA载量＜20拷贝／10⁶细胞：与慢性炎症、神经损伤、免疫恢复、远期疗效相关，治疗96周后该载量患者CD4/CD8细胞比值恢复更好
• 总HIV-1 DNA载量＜100拷贝／10⁶细胞：不同感染阶段cART后载量变化，可预测因素，与艾滋病免疫重建不全相关，治疗后控制者停药前特征

专家指导意见

HIV-1 DNA检测应用意义及适用情况

• 对感染诊断、病程评估、cART效果监测和预后预测有重要意义
• 用于感染临床诊断补充试验：抗体或抗原抗体筛查有反应个体
• 用于感染急性期或窗口期诊断：近期有明确流行病学史且筛查无反应个体，两次检测阳性可诊断
• 用于暴露婴儿早期诊断：HIV-1感染母亲所生小于18个月龄婴儿，两次检测阳性可诊断
• 用于PrEP/PEP人群感染监测：有助于发现突破性感染及不规范用药致感染
• cART后监测：RNA载量检测不出时，助于长期管理、防反弹耐药、评估效果和优化方案
• cART前预测：载量低，患严重并发症、免疫重建不全和耐药风险低
• 预测传播风险和病程进展：载量高，传播风险高、病程进展快而严重
• 功能性治愈研究和治疗效果评估：有望作为评估方法之一

检测注意事项及鼓励方向

• 不推荐情况：接受基于慢病毒载体的疫苗注射或药物治疗人群
• 实验室验证：开展检测前，对方法灵敏度和特异性验证
• 鼓励研发：鼓励企业和科研人员研发快速检测试剂